色譜柱的維護(hù)清洗方法

色譜柱的維護(hù)清洗方法
 
尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
分子尺寸排阻色譜柱吸附的主要原因
 
用于高分子分子量測定的分子尺寸排阻(SEC)色譜柱有SuperAW系列、α系列、PW·PWXL系列等產(chǎn)品。柱中填充介質(zhì)與樣品間常會(huì)發(fā)生：
 
(1)離子性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質(zhì)，由于羧基帶有負(fù)電荷(盡管非常少)，樣品中帶有正電荷的組分將會(huì)與其發(fā)生離子吸附作用。
 
(2)疏水性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質(zhì)，會(huì)與一些疏水性較高的樣品(如：具苯環(huán)物質(zhì))發(fā)生疏水吸附作用。
 
硅膠基質(zhì)的填料，常會(huì)與一些難溶性膜蛋白等疏水性物質(zhì)發(fā)生疏水性吸附作用。另外，殘存的硅醇基會(huì)與堿性物質(zhì)間發(fā)生離子吸附。對(duì)于硅膠基質(zhì)的填料，雖然不是發(fā)生吸附作用，但必須考慮酸性條件下官能團(tuán)會(huì)發(fā)生脫落或堿性條件下硅膠基質(zhì)會(huì)發(fā)生溶解的情況。
 
分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
☆樹脂基質(zhì)分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
1、離子性吸附:對(duì)于陽離子性吸附物質(zhì)，通過提高鹽濃度進(jìn)行過柱清洗。(1mol/L的醋酸緩沖液)
 
2、疏水性吸附:對(duì)于疏水性吸附物質(zhì)，可通過提高有機(jī)溶劑的濃度(PW·PWXL：50%、α及SuperAW：100%可)進(jìn)行過柱清洗。
 
3、復(fù)合吸附:對(duì)于陽離子性·疏水性物質(zhì)的去除，可提高鹽濃度進(jìn)行過柱，水洗后，提高有機(jī)溶劑濃度進(jìn)行過柱。
 
☆硅膠基質(zhì)分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
1、堿性物質(zhì)的去除(離子性吸附)；通過提高淋洗液的鹽濃度(通常0.5mol/L)進(jìn)行過柱清洗。
 
2、疏水性吸附的去除(疏水性吸附)；在淋洗液中添加甲醇、乙腈(10-20%)等水溶性有機(jī)溶劑進(jìn)行過柱清洗。本法請(qǐng)注意緩沖液中鹽的析出。
 
3、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑；在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性劑(Triton、Tween、Brij等)后進(jìn)行過柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。
 
一般來說，清洗時(shí)間可選擇為過柱5-10個(gè)柱體積便可。在附吸成分其吸附力極強(qiáng)時(shí)，即使進(jìn)行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復(fù)。另外，請(qǐng)充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法
反相硅膠色譜柱吸附的主要原因
 
反相硅膠柱填充介質(zhì)(固定相)與樣品間常常會(huì)發(fā)生下列吸附現(xiàn)象：
 
(1)殘存硅醇基與堿性物質(zhì)間的離子吸附；
(2)硅膠表面的金屬雜質(zhì)與金屬配位物質(zhì)間的吸附；
(3)疏水性極強(qiáng)的物質(zhì)在柱中的蓄積。以上現(xiàn)象，會(huì)引起反相色譜柱柱效下降、拖尾、重復(fù)性不良等狀況的發(fā)生
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法——疏水性物質(zhì)的去除:
 
使用有機(jī)溶劑(乙腈、甲醇、乙腈與THF的混合溶劑)進(jìn)行清洗。
 
考慮樣品成分對(duì)于有機(jī)溶劑的溶解性，選用比淋洗液濃度高的有機(jī)溶劑、或選用極性較低的有機(jī)溶劑進(jìn)行過柱清洗。這種情況下，有必要注意淋洗液中鹽的析出現(xiàn)象。
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法——堿性物質(zhì)(金屬配位物質(zhì))的去除:
 
使用酸性水溶液與有機(jī)溶劑的混合液(0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液)進(jìn)行過柱清洗。
 
*一般來說，清洗時(shí)間可選擇為過柱5-10個(gè)柱體積便可。在附吸成分其吸附力極強(qiáng)時(shí)，即使進(jìn)行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復(fù)。另外，請(qǐng)充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。