Waters高效液相色譜儀氨基酸分析標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程
1.設(shè)備和供應(yīng)：
1.1Waters breeze系列高效液相色譜
1.2色譜拄
1.3進(jìn)樣器
1.4渦旋攪拌器
1.5微量移液器及若干吸頭
1.6烘箱（55℃）
1.7AccQ·TagA衍生管
2.材料和試劑：
2.1AccQ·TagA濃液
2.2CH3CN
2.3AccQ·Fluor衍生劑
2.4AccQ·Fluor硼酸鹽緩沖液
2.5高純水
3.操作程序：
3.1色譜條件：
3.1.1色譜柱：AccQ·Tag column
3.1.2柱溫：37℃

3.2試液配制：
3.2.1流動(dòng)相：
A液：按1:10（v/v）將AccQ·TagA濃液與高純水稀釋,脫氣即得。
B液：按60:40（v/v）將CH3CN與高純水稀釋,脫氣即得。
3.2.2標(biāo)準(zhǔn)樣品配制：用微量移液器移取100ul氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品,加0.9ml高純水稀釋,混勻,備用。取稀釋液10ul加入衍生管,加AccQ·Fluor硼酸鹽緩沖液70ul,在渦旋攪拌下加入20ulAccQ·Fluor衍生劑,用封口膜封好,放入55℃烘箱中保溫10分鐘。取出,即可用于進(jìn)樣。
3.2.3供試品配制：按各供試品項(xiàng)下要求對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,照“標(biāo)準(zhǔn)樣品配制”方法,自“取稀釋液10ul加入衍生管”同法操作。
3.3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：
3.3.1色譜柱理論塔板數(shù)：取標(biāo)準(zhǔn)樣品10ul注入進(jìn)樣孔，記錄色譜圖，兩出主要成分的保留時(shí)間Tr和半峰高（W2/h）。按① 計(jì)算色譜柱的理論塔板數(shù).如果測(cè)得的理論塔板數(shù)低于7000應(yīng)改變色譜柱的某些條件,使理論塔板數(shù)達(dá)到要求。
3.3.2分離度：記錄色譜圖中相鄰兩峰的保留時(shí)間tr1和tr2,以及此相鄰兩峰的峰寬W1、W2。按②計(jì)算分離度，除另有規(guī)定外分離度應(yīng)大于1.5。
3.4樣品測(cè)定：分別取標(biāo)準(zhǔn)樣品與供試品，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中氨基酸含量。
3.5實(shí)驗(yàn)完畢后，用水清洗系統(tǒng)，然后用流動(dòng)相沖洗色譜注,方可關(guān)機(jī)
4.其它諸如高分子量物質(zhì)含量、其它物質(zhì)含量和鑒別同法測(cè)定，并依據(jù)藥品的不同國家藥品標(biāo)準(zhǔn)做相應(yīng)調(diào)整，諸如，分離柱類型，流動(dòng)相類別等。
5.附錄：
5.1做好洗脫液的脫氣處理，防止泵起動(dòng)后壓力波動(dòng)大流速不穩(wěn)定。
5.2灰塵或流通池的堵塞是檢測(cè)器出現(xiàn)故障的常見原因，在分析完高濃度的樣品之后，要使用大量的流動(dòng)相將其徹底沖出流通池。如果使用緩沖溶液作流動(dòng)相,分析完后務(wù)必用水沖洗管路,因?yàn)榫彌_溶液蒸發(fā)后會(huì)產(chǎn)生結(jié)晶,而引起管路堵塞。