摘要
蛋白質(zhì)核酸自動(dòng)分析儀操作說(shuō)明與注意事項(xiàng)
內(nèi)容
一、核酸濃度測(cè)定(包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo)
1. 例如待測(cè)定樣品為dsDNA(eg:PCR產(chǎn)物),按下鍵“7 / dsDNA”
(若待測(cè)樣品為ssDNA,eg:反轉(zhuǎn)錄合成的第一鏈cDNA產(chǎn)物,則相應(yīng)按下鍵“8 / ssDNA”;
若待測(cè)樣品為RNA,則按下鍵“9 / RNA”;
若待測(cè)樣品為Oligo(寡聚核苷酸),eg:PCR引物,則相應(yīng)按下鍵“6 / Oligo”。)
2. 將空白對(duì)照置入樣品孔。注意:空白對(duì)照是空白液,并非所有情況都是水。(例如用Tris溶液溶解DNA制品,則要用Tris液做空白對(duì)照。)
3. 按下鍵“Blank”;
4. 儀器記錄空白對(duì)照,設(shè)置為0.000A;
5. 將第一個(gè)樣品置入樣品孔;
6. 按下“Sample”;
7. 儀器顯示第一個(gè)樣品的吸光度值和濃度值,以及其他相關(guān)參考比值;
8. 直接放入第二個(gè)樣品;
9. 按下“Sample”;
10. 儀器顯示第二個(gè)樣品的吸光度值和濃度值,以及其他相關(guān)參考比值;
11. 依次測(cè)定,每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中,查看測(cè)定結(jié)果的方法如下:
(1)按下鍵“./ Function”
(2)選擇“DISPLAY-RESULT”,按Enter鍵,查看每個(gè)樣品的測(cè)定值記錄(本機(jī)可存儲(chǔ)100個(gè)樣品的測(cè)定值)。
設(shè)定樣品的稀釋度
(1)按下鍵“Dilution”;
(2)輸入樣品體積和稀釋液體積,按Enter鍵確認(rèn)。
二、蛋白質(zhì)濃度的直接測(cè)定(280nm測(cè)定)
1. 按下鍵“4 / Protein”;
2. 將空白對(duì)照置入樣品孔;
3. 按下鍵“Blank”;
4. 儀器記錄空白對(duì)照,設(shè)置為0.000A;
5. 將第一個(gè)樣品置入樣品孔;
6. 按下“Sample”;
7. 儀器顯示第一個(gè)樣品的吸光度值和濃度值,以及其他相關(guān)參考比值;
8. 依次測(cè)定,每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中,可查看測(cè)定結(jié)果。
三、蛋白質(zhì)濃度顯色法的間接測(cè)定(Bradford,Lowry, BCA)
1. 按下鍵“1 / Bradbord”or “2 / Lowry”or“BCA”選擇蛋白質(zhì)顯色反應(yīng)的方法;
注:Bradford鍵按兩次,每次顯示不同的測(cè)定范圍。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù)量、測(cè)定次數(shù)和濃度范圍。按下鍵“Parameter”用上下鍵 進(jìn)行選擇和參數(shù)調(diào)整。
3. 將空白對(duì)照置入樣品孔;
4. 按下鍵“Blank”;
5. 儀器記錄空白對(duì)照,設(shè)置為0.000A;
6. 將第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品(如需沿用已存儲(chǔ)的標(biāo)準(zhǔn)曲線,可直接測(cè)樣品)置入樣品孔;
7. 按下“Sample”或“Standard”;
8. 依次測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中,查看測(cè)定結(jié)果。
四、OD600 細(xì)菌生長(zhǎng)密度測(cè)定
1. 按下鍵“5 /OD 600”;
2. 將空白對(duì)照置入樣品孔;
3. 按下鍵“Blank”;
4. 儀器記錄空白對(duì)照,設(shè)置為0.000A;
5. 將第一個(gè)樣品置入樣品孔;
6. 按下“Sample”;
7. 儀器顯示第一個(gè)樣品的吸光度值和濃度值;
8. 依次測(cè)定,每個(gè)樣品的測(cè)定值將自動(dòng)存儲(chǔ)在機(jī)器中,查看測(cè)定結(jié)果。
注意事項(xiàng):
1 為了盡量減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)顆粒的干擾相對(duì)較小,結(jié)果穩(wěn)定。樣品的濃度不能過(guò)低或者過(guò)高。
2 混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現(xiàn)負(fù)值;
3 混合液中不能有氣泡,空白液無(wú)懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈;
4 必須使用相同的比色杯測(cè)試空白液和樣品,否則測(cè)定濃度結(jié)果差異太大;
5 換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇要一致;
6 不能采用窗口磨損的比色杯;
7 樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積(50ul);
8 通常濃度的樣品可以用10 mm光程長(zhǎng)度進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于高濃度的樣品,只需將比色皿旋轉(zhuǎn)90°,使用稍短的2 mm光徑進(jìn)行檢測(cè)。
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